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货号 YJ00012: 外泌体蛋白质组学
一、服务简介：
外泌体蛋白质组学研究，就是对来自不同外泌体中的蛋白质进行整体水平上的研究，有利于揭示外泌体的功能、筛选药物靶标以及寻找生物标志物等，在临床应用上具有重要意义。越来越多的研究表明，一些宿主或肿瘤细胞分泌的外泌体与肿瘤的发生、生长以及转移等过程密切相关。因此，外泌体蛋白质组学研究在疾病的临床诊断、疗效评价和预后追踪等方面具有重要作用。
二、服务平台仪器：
仪器名称 | 品牌货号 | 特征 | 功能作用 |
超高速离心机 | 贝克曼Optima XPN | 最大离心力802000g | 超高速离心提取 |
纳米粒子分析仪 | 马尔文NS300 | 粒径检测范围10-2000nm | 粒径分布和浓度 |
透射电镜仪 | 赛默飞Tecnai G2 | 观察微结构 | 拍摄外泌体形态 |
荧光显微镜 | 奥林巴斯 | 荧光和白光 | 外泌体细胞示踪 |
细胞培养箱 | 赛默飞 3111 | CO2培养箱 | 细胞培养 |
脑立体定位注射仪 | 众实 | 脑立体定位注射外泌体 | 定位注射外泌体 |
小动物活体成像仪 | Cliper IVIS lumina II | 波长范围：400-900nm | 外泌体活体示踪 |
动物房 | 国产品牌 | SPF级别 | 动物饲养 |
astral-DIA分析仪器 | Orbitrap Astral | 二级碎片离子定量 | 鉴定外泌体蛋白 |
三、服务流程：
外泌体的分离纯化和表征。
利用质谱的技术鉴定外泌体蛋白的组成。
外泌体蛋白质组数据分析。
四、样本要求：
血清样本： 5ml，最低2ml （全血10ml)；
血浆样本： 5ml，最低2ml （全血 8-10ml)；
无血清培养细胞上清：50ml；
其他如尿液、卵泡液、精液、分离好的外泌体、提好的总RNA等的样本要求请详询工作人员。
运输条件：客户邮寄标本需使用干冰运输，请提前跟公司销售联系并告知快递单号。也可联系公司销售员去上门取样品。
五、外泌体蛋白质组学科普知识：
外泌体蛋白质组学的研究离不开对外泌体分离纯化、外泌体鉴定、采用的蛋白质组学策略。
外泌体常见的蛋白质组学方法：外泌体的蛋白质组学鉴定基本和常规蛋白质组鉴定方法一致，都是基于（bottom up）自下而上的模式，即首先将蛋白酶解成肽段，然后利用液相色谱串联质谱技术分析肽段混合物，最后通过数据库检索实现蛋白质的鉴定。 基于质谱的的外泌体蛋白质组学可以按照是否有同位素标记非为非标记定量蛋白质组学和稳定的同位素标记的蛋白质组学。
1.非标记定量蛋白质组学技术
非标记定量的蛋白质组学技术研究外泌体可以分为4个步骤：1）分离纯化外泌体 2）外泌体的裂解、蛋白提取和溶液酶解3）肽段的预分离和色谱质谱技术分析4）数据分析、蛋白鉴定定量和数据统计。非标记定量的蛋白质组学技术是一种基于肽段图谱计数的方法，以肽段被质谱检测到的次数肽段二级图谱匹配的数目作为定量的依据，在质谱的依赖数据采集的模式下，丰度更高的肽段被质谱选择进行碎裂的频率也就越高，基于图谱技术的非标定量蛋白质组学技术是研究外泌体最广泛的技术，当然还可以比较不同样品中蛋白酶解的肽段的色谱峰面积或者质谱离子信号强度进行相对定量，这种方法也常用于外泌体蛋白质组学的研究。
2.稳定同位素标记定量蛋白质组学技术
在EVs的研究中，最常用的稳定的同位素标记技术就是SILAC、iTRAQ、TMT, SILAC技术主要用于培养细胞的外泌体蛋白质组学的分析.
3. DIA定量蛋白质组学
数据非依赖性采集 (Data independent acquisition，DIA)：采用 DIA 模式对每一例实验样本进行检测。 DIA在设置的扫描窗口内全部母离子都可以进入二级碎裂（因此，可重现性高），能够获取更多的谱图信息，最终鉴定的蛋白种类依赖于建库数据。
DIA的数据采集模式比常规非标定量DDA模式，有更少的缺失值，数据记录更为完整，重复性大幅度提高；DIA定量方式由一级质谱信号定量升级为由每个肽段通过二级质谱峰面积信号进行定量， 定量信息更为全面，DIA定量准确性更高。