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细胞周期

一、服务简介：

细胞周期（Cell Cycle）是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全部过程。按照染色体DNA含量也可以分为3个时相：G0/G1期，发生在DNA复制之前，染色体表现为二倍体（2N）；S期，DNA正在复制，但还没有全部完成，染色体介于二倍体和四倍体之间（2N<染色体<4N）；G2/M期，DNA复制过程已完成，染色体表现为四倍体（4N）。

细胞周期各时相的DNA含量不同，通常正常细胞的G1/ G0 期具有二倍体细胞的DNA含量（2N），而 G2/ M 期具有四倍体细胞的DNA含量（4N），而S期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。

PI（碘化丙啶）可以与DNA结合，其荧光强度直接反映了细胞内DNA含量。

二、样本要求：

• 固定的细胞样本：制备的单细胞悬液离心后，去除上清，加入2-3ml预冷70%乙醇，于-20℃固定16h以上，4℃运输。
• 固定前细胞数量不少于2*10⁶个/样本。

三、实验流程：

• 细胞培养处理，细胞铺板培养，待细胞生长达到60%-70%，根据实验需求处理(比如加入药物)，继续培养。
• 细胞收集，用胰酶消化细胞，吹打成单细胞悬液，800rpm离心5min,收集细胞沉淀，上清保留，用预冷PBS重悬细胞，制备成单细胞悬液。
• 细胞固定，制备的单细胞悬液离心后，去除上清，加入2-3ml预冷70%乙醇，于-20℃固定16h以上。
• 细胞染色，1000rpm 离心5min 后弃上清，用2ml的PBS洗涤2次(注意避免Dnase污染),加入适量的周期染料，37C避光孵育30min。
• 上机前过滤，PI具有很强的粘附性,容易形成细胞聚团，建议可以使用200目的筛网过滤样本后上机。
• 上机分析，低速上样本，建议有效的单个细胞采集10000个以上。