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细胞凋亡

一、服务简介：

凋亡细胞对所有用于细胞活性鉴定的染料如PI有抗染性，坏死细胞则不能。细胞膜有损伤的细胞的DNA可被PI着染产生红色荧光，而细胞膜保持完好的细胞则不会有红色荧光产生。因此，在细胞凋亡的早期PI不会着染而没有红色荧光信号。正常活细胞与此相似。在双变量流式细胞仪的散点图上，左下象限显示活细胞，为（FITC-/PI-）；右上象限是非活细胞，即坏死细胞，为（FITC+/PI+）；而右下象限为凋亡细胞，显现（FITC+/PI-）。

二、样本要求：

• 固定的细胞样本：制备的单细胞悬液离心后，去除上清，加入2-3ml完全培养基，4℃运输。
• 固定前细胞数量不少于2*10⁶个/样本。



三、实验流程：

• 细胞收集：悬浮细胞直接收集到10ml的离心管中，每样本细胞数为（1~5）×10⁶/mL　500~1000r/min离心5min，弃去培养液。
• 用孵育缓冲液洗涤1次，500~1000r/min离心5min。
• 用100ul的标记溶液重悬细胞，室温下避光孵育10~15min。
• 500~1000r/min离心5min沉淀细胞孵育缓冲液洗1次。
• 流式细胞仪分析：流式细胞仪激发光波长用488nm，用一波长为515nm的通带滤器检测FITC荧光，另一波长大于560nm的滤器检测PI。