一站式科研解决方案

细胞增殖

一、服务简介：

细胞增殖检测常见方法包括：细胞计数法、MTT法、CCK-8法、EdU和BrdU法。流式检测增殖常见的有EdU和BrdU法。

二、样本要求和实验流程：

• 细胞接种：在培养板中接种细胞悬液，每组细胞设置3个复孔。将培养板放入培养箱中培养至合适的密度（37℃, 5% CO₂）；
• 细胞处理：按照实验设计给予细胞不同处理，如药物或培养条件变化；
• 细胞培养：将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：24或48小时）；
• 用完全培养基将EdU稀释为20μM的工作液，向培养板中加入EdU工作液，使其浓度为10μM，该浓度适用于大部分细胞；
• 将细胞置于37℃培养箱中孵育适当时间（约2h）；
• 完成标记后，去除培养基，用PBS洗涤1-2次；
• 每孔加入50μL 4%多聚甲醛固定细胞10-15min；
• 去除固定液，PBS洗涤细胞3次，每次3-5 min；
• 每孔加入通透液（含Triton X-100的PBS），室温孵育10-15min；
• 去除通透液，PBS洗涤细胞1-2次，每次3-5 min；
• 根据EdU反应检测试剂盒说明进行荧光标记；有需要可同时使用DAPI等核染料进行细胞核染色；
• 通过荧光显微镜、共聚焦显微镜或流式细胞仪等检测有荧光标记的EdU阳性细胞，计算其占细胞总数的比例，以评估细胞增殖水平。



注意事项：

1. EdU孵育时间应根据细胞周期长度和增殖速度适当调整；

2. 确保染色过程严格避光，以保护荧光信号；

3. 根据实验需求选择合适的荧光，避免撞色；

4. 稀释EdU需使用完全培养基，使细胞保持正常的增殖状态。