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线粒体膜电位JC-1流式分析

一、服务简介：

JC-1是一种碳氰化合物类阳离子荧光染料，可作为检测线粒体跨膜电位指示剂。JC-1在细胞内以聚合体和单体两种不同的物理形式存在，分别处于不同的荧光发射峰。当JC-1 浓度低或膜电位水平低时，主要以单体形式存在，激发波长为527nm，呈绿色荧光；当JC-1浓度升高或线粒体膜电位水平较高时，形成聚合物，发出红色的荧光，激发波长为590nm。当细胞发生凋亡时，线粒体跨膜电位被去极化，JC-1从线粒体内释放，红光强度减弱，以单体的形式存在于胞质内发绿色荧光，根椐这一特征就可以检测线粒体膜电位的变化。

二、样本要求及实验流程

• 细胞培养；
• 用适当的方法诱导细胞凋亡，同时设立阴性依照组合阳性对照组，收集细胞；
• 用PBS洗涤细胞三次，收集不多于1×106的细胞；
• 取100 μL 10×Incubation Buffer加900μL灭菌去离子水稀释成1×Incubation Buffer，混匀并预热至37℃；
• 吸取500 μL 1×Incubation Buffer，加入1μL JC-1，涡旋混匀配成JC-1工作液；
• 取500 μL JC-1工作液将细胞均匀悬浮，37℃，5% CO2的培养箱中孵育15~20min。
• 室温离心（2000rpm,5min）收集细胞，用1×Incubation Buffer洗两次；
• 吸取500 μL 10×Incubation Buffer重新悬浮细胞；
• 流式细胞仪检测，分析。