Exosome isolation kit Plus (for urine)
外泌体提取试剂盒(尿液)-基础版
产品名称 | 货号 | 规格 | 价格(元) |
外泌体抽提试剂盒(尿液)-基础版 | rcnexo109-25ml | 25ml | 1058 |
外泌体抽提试剂盒(尿液)-基础版 | rcnexo109-50ml | 50ml | 2198 |
运输和保存方法:室温
注意:本产品仅适用于科研实验!
一、产品简介:
外泌体(Exosomes)是一种直径在30-200 nm的微小囊泡,可由机体众多类型细胞释放,并广泛分布于唾液、血浆、乳汁、尿液等体液当中。Exosome携带有多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息。目前外泌提取主要有超速离心、试剂盒提取等方法。其中超速离心分离得到外泌体,纯度高,可满足于后续不同实验的需求,但是仪器要求高,周期长,工作量大。
本试剂盒可以快速从尿液中获得大量完整的外泌体颗粒,普通的实验室离心机就可以完成,提取的外泌体适用于下游的细胞共培养、电镜、分析、Western Blot、荧光定量(qPCR)和高通量测序等应用。
二、操作方法:
尿液样本收集:
收集新鲜的样品,快速加入尿液预处理试剂(尿液体积:尿液预处理试剂=10:1)(货号:rcnexo109p),快速旋涡混匀。
4℃短期存储存储(不要超过72h)或者-80℃(不超过2个月)。
样品预处理:
1、收集新鲜的样品,置于冰上待用;若为冻存的样品,可水浴中解冻,待完全融化后置于冰上待用。
2、样品转移至离心管中,4℃,3000×g 离心10 min,弃沉淀,并将上清转移至新的离心管中。
外泌体分离:
使用前请将外泌体抽提试剂充分混匀。
向样品中加入1/4样本体积的外泌体抽提试剂,涡旋振荡1 min充分混匀后,放置于4℃冰箱静置2-3 h(静置时间越久提取效率越高,但不能超过24小时)。
尿液体积 | 外泌体抽提试剂 |
20ml | 5ml |
40ml | 10ml |
取出装有混合液的离心管,4℃,10,000×g离心60 min,弃上清,收集富含外泌体的沉淀。
再次离心:将含有沉淀的离心管再次于4℃以10,000×g离心2min,弃上清(注:尽可能吸尽上清液)。
外泌体重悬:取合适量的1×PBS均匀吹打离心沉淀物,待其溶解后,将重悬液转移至新的1.5mL离心管中(建议用200 μL左右1×PBS重悬)。
收获外泌体颗粒:将含有重悬液的1.5mL离心管于4℃以12,000×g离心2min,保留上清液,其中富含外泌体颗粒(若沉淀较多,可12,000×g,2min离心多次至无明显沉淀,每次取离心上清液)。
纯化外泌体:将收获的外泌体颗粒粗品转入纯化柱(货号:rcnexo104)的上室中,于4℃以3,000×g离心10min,离心后收集纯化柱管底的液体,此液体即为纯化后的外泌体颗粒(注:纯化柱不可重复使用)。
纯化后的外泌体可于4℃保存3天,如需长期保存建议存放在-80℃,建议对外泌体进行分装后保存,避免反复冻融。
三、结果展示
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NTA结果显示抽提获得的外泌体分散性好,大小均一,峰形单一,符合外泌体特征。 | 透射电镜结果显示抽提获得的外泌体呈现典型的双层囊膜结构,背景清晰。 | WB结果显示抽提的外泌体表达TSG101,CD63和CD81等外泌体标记蛋白。 |
注意事项:
为了确保获得的外泌体提取成功,请先购买试剂盒,尿液收集后需及时添加预处理试剂,我们也有配套的尿液预处理试剂(rcnexo109p)在售,如果考虑后期使用超速离心,也可以先购买此试剂。;
产品只针对尿液来源的外泌体分离,不适用,细胞上清,血清/血浆中外泌体的抽提,如果需要进行血清/血浆的外泌体分离, 请选用血清/血浆外泌体快速抽提试剂盒;
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
FAQ: